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副猪嗜血杆菌转铁结合蛋白A基因的原核表达与鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 黄晓慧;辛伟;魏建忠;连凯琪;郑海学;朱启运;才学鹏;李郁

作者机构：

关键词： 副猪嗜血杆菌;转铁结合蛋白A基因;原核表达;鉴定

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2012 年 10 期

页码： 1053-1057

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得副猪嗜血杆菌(HPS)转铁结合蛋白A基因(tbpA)的表达产物,根据GenBank发表的HPS(SH0165株)tbpA的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以HPS血清13型安徽分离株(LJ3)的基因组DNA为模板,利用PCR扩增tbpA基因,然后将其克隆至pET-SUMO载体,构建重组原核表达质粒pET-SUMO-tbpA,通过PCR鉴定和测序确认,将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)中,并进行IPTG诱导表达和His-Ni-resin纯化目的蛋白。经SDS-PAGE检测,获得了110ku的表达产物,与预期大小的转铁结合蛋白A(TbpA)的分子质量一致。Western-blot分析表明,表达产物与HPS阳性血清能发生反应,显示表达产物具有良好的免疫活性。结果表明,成功表达的TbpA为研制HPS新型疫苗和诊断试剂奠定了基础。

分类号： S852.61

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