文献类型： 中文期刊
作者： 李亚军;茹毅;郝荣增;蒋成辉;王伟;张越;张贵才;刘华南;卢炳州;杨洋;陶世宇;杨锐;宋向东;陈娇;余四九;郑海学
作者机构：
关键词： 牛病毒行腹泻病毒;E2蛋白;真核表达;CHO悬浮培养;免疫原性
期刊名称：畜牧兽医学报
ISSN： 0366-6964
年卷期： 2022 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2021-2022年度） ; ; 科技核心（2021版） ; ; 农林核心（2020版）
摘要： 旨在利用悬浮培养CHO细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus， BVDV）E2蛋白，并鉴定纯化E2蛋白的免疫原性。本研究以BVDV-1 NADL株基因序列为基础，构建BVDV E2蛋白的重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-E2，转染经悬浮培养的CHO细胞进行分泌表达，收集细胞培养上清，进行亲和层析法纯化，SDS-PAGE电泳鉴定蛋白表达和纯化，Western blot鉴定与His抗体和BVDV阳性血清反应性，利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔，用细胞间接免疫荧光（IFA）和ELISA鉴定E2蛋白的反应活性。纯化E2蛋白经BCA蛋白定量试剂盒检测后表达量高达1.228 mg·mL－1；Western blot结果显示，利用His抗体和BVDV阳性血清均可检测到目的蛋白的特异性条带；新西兰大白兔一免后第7天利用间接ELISA可检测到血清抗体阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平达到1:1 024 000；IFA实验结果显示，该血清抗体可检测到BVDV感染MDBK细胞中E2蛋白的表达，进一步证实纯化的E2蛋白具有良好的免疫原性和特异性。本研究成功利用CHO悬浮培养真核表达系统制备了纯化的BVDV E2蛋白，该蛋白具有良好的免疫原性，为BVDV的诊断方法及其新型亚单位疫苗研制奠定了基础。
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