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犬细小病毒VHH抗体的文库构建、表达及其鉴定

文献类型： 中文期刊

作者： 冯倩倩;王召阳;袁维峰;姜一曈;庞忠宝;朱鸿飞;贾红

作者机构：

关键词： 犬细小病毒;VHH抗体;噬菌体文库;真核表达

期刊名称：中国兽药杂志

ISSN： 1002-1280

年卷期： 2023 年 1 期

页码：

收录情况： 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为构建特异性犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的纳米抗体库,并获得特异性抗CPV的重链单域抗体(Single variable domain on a heavy chain antibodies,VHH抗体),以分离鉴定的一株CPV-2 c毒株(TS02株)作为免疫原免疫羊驼,四免后采集外周血,分离淋巴细胞,利用巢式PCR扩增VHH序列,通过噬菌体展示技术成功构建了纳米抗体的CPV免疫文库,进一步通过ELISA特异性筛选具有高亲和力的抗CPV纳米抗体序列.将筛选出的抗体序列插入pcDNA3.1真核表达载体构建pcDNA3.1-VHH重组质粒,采用PEI转染高密度的HEK293 F悬浮细胞,瞬时表达、纯化VHH,进行鉴定.结果表明,四次免疫后羊驼血清效价高达1:25000,达到了建库要求,构建的纳米抗体的CPV免疫文库,库容达2×106 CFU/mL,文库多样性良好.通过特异性筛选获得了4株具有高亲和力和特异性的抗CPV纳米抗体序列,采用HEK293 F细胞瞬时表达并纯化获得4个重组VHH,分别是CPV-VHH-H1、CPV-VHH-D4、CPV-VHH-F5和CPV-VHH-E3.ELISA和IFA试验结果表明,表达出的4株重组纳米抗体均能够特异性结合CPV.本研究成功构建了CPV特异性纳米抗体文库,并筛选出4株特异性结合CPV的VHH抗体,为VHH抗体在犬细小的诊断和治疗方面的应用进行了初步探索.

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