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日本血吸虫胰岛素样多肽的真核表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 岳生赟;王帅;何伟;王力;刘仲藜;曾巧英;才学鹏

作者机构：

关键词： 日本血吸虫;胰岛素样多肽;真核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2017 年 7 期

页码： 805-809

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）

摘要： 为克隆和表达日本血吸虫胰岛素样多肽基因(Sjilp)并制备特异性多克隆抗体,根据基因组注释信息,设计特异性引物,利用RT-PCR技术从日本血吸虫成虫m RNA中成功扩增出长度为588 bp的特异性c DNA序列,其CDS序列长393 bp。基于毕赤酵母密码子偏好性,对Sjilp基因密码子进行优化,构建p PIC9KSjilp重组表达载体,并在毕赤酵母GS115中进行诱导表达。SDS-PAGE与Western-blot检测结果显示,重组蛋白Sj-ILP获得高效表达,其大小约为15 ku,与预期结果一致。利用合成肽技术,设计并合成得到2条特异性的肽段,偶联KLH,免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,间接ELISA检测其效价达到1︰51 200,Western-blot鉴定表明这2条特异性多肽具有良好的免疫原性。本试验为后续验证Sj-ILP与其结合蛋白的功能奠定了良好的基础。

分类号： S852.735

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