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猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析

文献类型： 中文期刊

作者： 尹才;骆学农;王帅;陈光丽;曾巧英;才学鹏

作者机构：

关键词： 猪带绦虫;硫氧还蛋白过氧化物酶;原核表达;生物学特性分析

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2014 年 45 卷 09 期

页码： 1512-1517

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪带绦虫(Ts)是一种重要的人畜共患寄生虫,硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白。为研究TsTPx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标,提取猪带绦虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增tstpx基因,测序分析后构建原核表达载体pET-30a(+)-tstpx,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍离子亲和层析纯化TsTPx蛋白并进行生物学特性分析,包括抗氧化功能和抗原性。结果如下:SDS-PAGE分析表明,表达的TsTPx蛋白约25ku,主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中。抗氧化功能分析表明,在金属催化氧化(MCO)体系中,TsTPx蛋白对质粒DNA超螺旋结构的保护率与质量浓度呈正相关,20μg·mL-1时可100%保护,电泳图谱中被氧化的开环慢迁移带完全消失;H2O2还原体系中,TsTPx蛋白对H2O2的还原率与质量浓度呈正相关,100μg·mL-1时,在含二硫苏糖醇(DTT)体系中,还原率达69.9%,在不含DTT体系中为54.5%。抗原性分析:Western blotting显示TsTPx蛋白可被猪带绦虫囊尾蚴阶段阳性血清识别,具有良好的反应原性;用TsTPx蛋白免疫家兔,间接ELISA检测的抗体效价高达1∶320 000,具有良好的免疫原性。本研究表达的TsTPx蛋白具有生物学活性和良好的抗原性,为进一步阐明其生物学功能和研制猪囊虫病疫苗奠定了基础。

分类号： S852.734

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