文献类型： 中文期刊
作者： 陈艳;王飞飞;杨焕良;乔传玲;陈化兰;张秀英
作者机构：
关键词： H3N2 ; 猪流感病毒 ; 单克隆抗体 ; 噬菌体展示 ; 抗原表位
期刊名称：中国预防兽医学报
ISSN： 1008-0589
年卷期： 2021 年 43.0 卷 6.0 期
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2020-2021年度） ; 农林核心（2020版） ; 科技核心（2020版）
摘要： 为制备H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体(MAb)并对其抗原表位进行鉴定,本研究采用RT-PCR方法扩增H3N2亚型SIV的HA基因,将其克隆至真核表达载体pCAGGs中,获得重组质粒pCAGGs-HA,以重组质粒pCAGGs-HA免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,采用血凝抑制(HI)试验和ELISA方法筛选出1株稳定分泌抗SIV HA1蛋白MAb的杂交瘤细胞株(3F8),经ELISA检测结果显示其诱导小鼠产生的腹水效价为1∶106;HI试验检测结果显示其效价为12 log2.利用噬菌体随机7肽库对纯化的抗H3N2亚型SIV HA1蛋白的MAb 3F8进行了 4轮筛选,经DNA测序得到3个7肽序列,分别是"HPRRRRV"(E1)、"WPFHHHR"(E2),"IERGRTS"(E3),3个7肽序列经比对显示与 H3N2 SIV HA1 蛋白有部分同源区,为HA蛋白的模拟表位,分别位于HA1蛋白序列的157、158位(E1)、196、199、200位(E2)、276、279、282位(E3),即位于流感病毒HA蛋白5个抗原位点中的B位点与C位点,且均位于HA1段上,与制备的抗HA1段蛋白的MAb鉴定结果一致.本研究制备了 SIVH3N2亚型的HA蛋白MAb,并利用噬菌体短肽库技术获得该SIV HA模拟表位,为进一步设计具有广谱保护性的SIV表位疫苗提供了数据支持.
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