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非洲猪瘟病毒pK145R蛋白的原核表达及抗血清的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 张涛清;张元峰;赵改红;郑君;翁长江

作者机构：

关键词： 非洲猪瘟病毒;pK145R蛋白;原核表达;多克隆抗体

期刊名称：中国动物传染病学报

ISSN： 1674-6422

年卷期： 2023 年 1 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; ; 科技核心（2023版） ; ; 农林核心（2020版）

摘要： 为制备兔抗ASFV pK145R蛋白的多克隆抗体,本研究以中国首次分离的ASFV HLJ/18毒株K145R基因的真核表达质粒pCAGGS-Flag-K145R为模板扩增K145R基因,构建重组原核表达质粒pET-21a-K145R,利用镍亲和层析预装柱纯化pK145R蛋白并免疫新西兰大白兔,制备兔抗ASFV pK145R蛋白多克隆抗体,并通过免疫印迹(WB)、间接免疫荧光(IFA)及免疫沉淀(IP)试验对该抗体进行验证.结果显示:本研究成功构建了原核表达质粒pET-21a-K145R,将该质粒转化细菌BL21(DE3)获得能够可溶性表达pK145R蛋白的重组菌,分子量约为16.0 kDa;利用高度纯化的ASFV pK145R蛋白,制备了兔抗ASFV pK145R蛋白的多克隆抗体,该抗体能够特异性地识别HEK293T细胞中瞬时表达的Flag-K145R蛋白和ASFV感染猪肺泡巨噬细胞中表达的ASFV K145R蛋白.本实验为深入研究pK145R蛋白的功能及其在ASFV感染致病性中的作用奠定了基础.

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