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基于CRISPR/Cas9技术构建猪GRSF1基因敲除细胞系及其对细胞活性的影响分析

文献类型： 中文期刊

作者： 杜鹏飞;彭听雨;范双旗;郑海学;朱紫祥;陈金顶

作者机构：

关键词： GRSF1;PK-15;CRISPR/Cas9;基因敲除

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）

摘要： 本研究旨在利用CRISPR/Cas9技术构建鸟嘌呤富含序列因子1(guanine-rich sequence factor 1，GRSF1)基因敲除的猪肾细胞(porcine kidney-15，PK-15)，并探究GRSF1基因敲除对于细胞活性的影响。首先，设计了4条靶向猪源GRSF1基因的sgRNAs(sgRNA1、sgRNA2、sgRNA3和sgRNA4)，经退火后与慢病毒载体质粒(Lenti-CRISPR v2)连接。随后将构建成功的慢病毒载体质粒与辅助质粒pMD2.G和psPAX2共转染人胚胎肾细胞(HEK293T)，获得慢病毒并感染PK-15细胞。最终经嘌呤霉素筛选和梯度稀释法获得GRSF1敲除(knock-out，KO)的PK-15单克隆细胞系。通过Western-blot及测序验证GRSF1的敲除效率，然后进行单克隆细胞活性检测及IL-6水平检测。结果表明，本研究成功获得3株GRSF1基因敲除成功的PK-15单克隆细胞系，并证实GRSF1基因敲除影响PK-15细胞中IL-6的上调，为后续研究猪GRSF1的生物学功能提供细胞模型。

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