文献类型： 中文期刊
作者： 席韬;罗俊聪;朱昱茜;林永玉;陈婕;张帆;石鑫泰;何印娣;李帅鹏;徐继英;田宏;郑海学
作者机构：
关键词： 布鲁氏菌;BP26;原核表达;双抗原夹心ELISA
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2024 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 以期建立鉴别检测布鲁氏菌血清抗体的ELISA方法，用于区分BP26基因缺失疫苗免疫。本研究根据NCBI公布的布鲁氏菌M5-90株的参考序列，通过预测BP26的同源性、跨膜区及抗原性等，构建了pET-28a-BP26和pMAL-c2x-BP26两个载体，利用大肠杆菌表达蛋白，亲和层析纯化目的蛋白。采用Western-blot方法分析目的蛋白反应活性，以His-BP26作为包被抗原，HRP标记的MBP-BP26作为检测抗原，经过优化，建立了一种双抗原夹心ELISA方法。结果显示，根据统计学分析，双抗原夹心ELISA临界值为0.35；经检验，该方法与口蹄疫病毒-O型、牛结节皮肤病病毒、牛传染性腹泻病毒的抗体阳性血清以及赤羽病病毒多抗均无交叉反应，敏感性可达1∶640；批间及批内变异系数均小于10％。用该方法对40份已知虎红平板凝集试验检测背景的羊血清进行检测，结果检出8份阳性，32份阴性。由此说明，本研究建立的ELISA方法特异性强、敏感性高、重复性好，可区分BP26基因缺失疫苗免疫，用于布鲁氏菌病的血清学调查和临床诊断。
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