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一种平末端连接的有效方法

文献类型： 中文期刊

作者： 沈瑞忠;袁世山;刘桂永;王秀丽;于康震;卢景良

作者机构：

关键词： 平末端连接；连接效率

期刊名称：生物技术

ISSN： 1004311X

年卷期： 1995 年 03 期

页码：

摘要： 转化效率与质粒大小成反比，而当质粒大于１５ｋｂ时，转化效率将成为限制因素，此时提高连接效率极为必要，特别是对于具有普遍性而效率又低的平末端连接。我们在连接反应体系中，加入相应的产生平末端质粒载体的限制性内切酶ＨＰａＩ、或ＥｃｏＲＶ，与不加ＨＰａＩ、或ＥｃｏＲＶ的连接反应相对照，连接产物转化大肠杆菌ＪＭ１０９后，产生的转化子比率分别为１９．９％和５．６％（ＰＦＰ７），３２．６％和９．７％（ｐＦＢ１７５），２４．３％和３．６％（ｐＦＨ１２），３７．９％和１０．３％（ｐＦＰ２６），且从转化株中分离的质＃ＤＮＡ经电泳、酶切鉴定为目的产物。ＨｐａＩ、或ＥｃｏＲＶ的存在极有利于插入片段连接到载体上，同时抑制载体自身环化或寡聚化，大大提高了平末端连接效率。

分类号： Q81

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