文献类型： 中文期刊
作者： 李亚军;茹毅;郝荣增;秦晓东;卢炳州;杨洋;刘华南;张越;龚真莉;刘艳红;余四九;郑海学
作者机构：
关键词： 牛病毒性腹泻病毒;Erns蛋白;真核表达;中华仓鼠卵巢（CHO）细胞悬浮培养;免疫原性
期刊名称：生物工程学报
ISSN： 1000-3061
年卷期： 2023 年
页码：
收录情况： 北大核心（2020版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2023版）
摘要： 本研究利用中华仓鼠卵巢（Chinese hamster ovary， CHO）细胞表达系统制备牛病毒性腹泻病毒（bovine viral diarrhea virus， BVDV） Erns蛋白，并分析其免疫原性。以BVDV-1 NADL标准毒株基因序列为基础，构建BVDV Erns蛋白重组真核表达质粒pcDNA3.1-BVDV-Erns，转染悬浮培养的CHO细胞，进行上清分泌表达。SDS-PAGE分析Erns蛋白的表达和纯化，并用抗His单克隆抗体和BVDV阳性血清进行Western blotting鉴定纯化蛋白；进一步使用纯化的Erns蛋白免疫新西兰大白兔，通过间接ELISA和细胞间接免疫荧光（indirect immunofluorescence， IFA）实验检测血清抗体水平及其免疫反应活性，用病毒中和实验测定免疫兔血清的中和抗体滴度。BCA蛋白定量试剂盒检测纯化的Erns蛋白浓度为0.886 mg/mL，Western blotting结果显示，抗His单克隆抗体和BVDV阳性血清均能够与纯化的Erns蛋白发生特异性免疫反应。间接酶联免疫吸附法（enzyme linked immunosorbent assay， ELISA）和IFA实验结果显示，一免后第7天血清抗体呈阳性，并持续至免疫后第28天，血清抗体效价水平可达1:128 000，且该血清抗体可以与MDBK细胞中感染的BVDV病毒发生特异性免疫反应。重组Erns蛋白免疫兔可诱导动物机体产生病毒中和抗体，中和效价为log10=2.71。本研究利用CHO细胞表达系统成功制备了纯化的BVDV Erns蛋白，并通过体内和体外实验证明，该重组蛋白具有良好的免疫原性，为牛病毒性腹泻（bovine viral diarrhea， BVD）诊断方法及新型亚单位疫苗的研制奠定了基础。
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