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鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白的原核表达及纯化

文献类型： 中文期刊

作者： 肖星星;柳纪省;殷相平

作者机构：

关键词： 鞭毛蛋白;原核表达;纯化

期刊名称：中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2015 年 42 卷 04 期

页码： 871-876

收录情况： 北大核心

摘要： 本试验旨在表达并纯化鞭毛蛋白,为研究并获得高效蛋白佐剂奠定基础。用PCR扩增鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fljB、fljB’和fliC,将扩增产物克隆至pMD19-T Simple Vector上,构建了克隆质粒pMD19-fljB、pMD19-fljB’和pMD19-fliC。克隆质粒经双酶切后将片段克隆至pET-30a中,构建原核表达质粒pET30a-fljB、pET30a-fljB’fliC和pET30a-fliC。经PCR、酶切及测序鉴定后将阳性表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,诱导表达后的菌体经超声处理取上清,用Ni柱进行纯化。Western blotting证实了表达的蛋白能与豚鼠抗鞭毛蛋白血清发生特异性反应。通过优化表达条件,鞭毛蛋白fljB、fliC和fljB’fliC均以可溶性表达,纯化得到的鞭毛蛋白为后续评价其佐剂效应奠定基础。

分类号： S852.61

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