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稳定表达脯氨酰寡肽酶基因的PK15细胞系的建立及其对口蹄疫病毒增殖的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 王姿逸;茹毅;卢炳州;杨洋;赵陇和;李亚军;李建斌;李明桂;马坤;冷非凡;郝荣增;郑海学

作者机构：

关键词： 脯氨酰寡肽酶(POP);PiggyBac转座子系统;PK15细胞;病毒增殖

期刊名称：微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 【目的】利用PiggyBac转座子系统构建稳定表达脯氨酰寡肽酶(prolyl oligopeptidase， POP)基因的猪肾PK15细胞系，并系统评估POP蛋白表达对口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus， FMDV)增殖的影响。【方法】构建重组表达质粒，转染PK15细胞后通过Western blotting检测目的蛋白表达；采用有限稀释法筛选获得稳定表达POP的单克隆细胞系，利用RT-qPCR和Western blotting检测POP基因和蛋白表达的稳定性；通过Cell Counting Kit-8试验评估筛选细胞系的细胞活力；综合运用Western blotting、RT-qPCR以及病毒滴度测定等方法，系统分析FMDV在稳定表达细胞系中的复制。【结果】成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15单克隆细胞系；构建的稳定细胞系与对照细胞系相比，细胞活力无显著差异；单克隆细胞系传代至P30代时，POP蛋白表达水平保持稳定；接种病毒实验结果显示，FMDV在稳定表达POP的PK15细胞系中的增殖水平显著高于对照组，且在不同代次细胞系中保持稳定。【结论】本研究成功构建了稳定表达POP蛋白的PK15细胞系，并证实该细胞系可显著促进FMDV的复制，为进一步解析POP蛋白促进FMDV复制的分子机制提供了实验材料。

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