文献类型： 中文期刊
作者： 邵文华;杨帆;曹伟军;陈创伟;王伟;郑海学;张伟;朱紫祥;赵宗胜
作者机构：
关键词： CRISPR/Cas9;TNF受体关联蛋白3;细胞系;口蹄疫病毒
期刊名称：中国兽医科学
ISSN： 1673-4696
年卷期： 2025 年
页码：
收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版） ; ; 农林核心（2024版）
摘要： 本研究利用CRISPR/Cas9技术构建了TRAF3基因敲除的PK-15猪肾细胞模型，该模型为阐明TRAF3在口蹄疫病毒（FMDV）复制中的调控作用提供实验材料。针对猪TRAF3基因的编码区序列，设计并筛选出2条高效特异的单向导RNA（sgRNA），并将其分别克隆至CRISPR/Cas9载体PX459中。通过脂质体介导的转染技术将重组质粒导入PK-15细胞后，采用嘌呤霉素梯度筛选和有限稀释法相结合的策略，成功获得单克隆细胞系。采用DNA测序结合蛋白质免疫印迹技术对构建的细胞系进行验证，结果显示，TRAF3基因存在特异性碱基缺失突变，且未检测到相应蛋白表达，由此确认TRAF3基因敲除细胞模型构建成功。为探究该基因缺失对FMDV复制的调控作用，通过Western-blot、实时定量PCR（RT-qPCR）及半数组织培养感染剂量(TCID50)等多维度检测发现，TRAF3基因的稳定敲除可增强FMDV的复制能力。本研究结果不仅为阐明TRAF3的生物学功能提供了工具细胞系，更为后续研究该基因在病毒-宿主相互作用中的分子机制奠定了基础。
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