数字农科院2.0

绵羊痘病毒A11R基因的优化表达及抗体间接ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 朱学亮;赵志荀;蒙学莲;曾巧英

作者机构：

关键词： 绵羊痘病毒;A11R基因;密码子优化;诱导表达;ELISA方法

期刊名称：中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2022 年

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 本研究旨在对免疫原性目的蛋白基因A11R优化表达的基础上建立羊痘血清学检测方法，为羊痘防控提供技术支撑。绵羊痘病毒A11R基因经密码子优化后合成目的基因，连入pET-28a（+）载体，并转化至BL21（DE3）大肠杆菌，pET28a-A11R经鉴定后进行诱导表达。结果显示，经密码子优化后的A11R蛋白的表达量显著增加，更易从转化的大肠杆菌裂解上清液和经过复性的包涵体中大量纯化获得。将该蛋白作为包被抗原，通过优化反应条件，建立检测羊痘抗体的间接ELISA方法，并进行特异性和敏感性试验，用该方法与商业化试剂盒对临床样品进行检测。结果显示，A11R蛋白的最佳包被剂量为0.5 μg/孔，待检血清最适稀释度为1∶100，家兔抗羊IgG最适稀释度为1∶20 000。用建立的间接ELISA方法检测小反刍兽疫、羊口疮、口蹄疫的阳性血清，结果均为阴性，无交叉反应，具有良好的特异性。当羊痘阳性血清稀释到1∶1 600时抗体检测仍为阳性，具有较高的敏感性。用该ELISA方法与商业化试剂盒检测临床样品，符合率为98.71%，具有良好的一致性。上述结果表明，本研究建立了基于A11R蛋白的羊痘血清学免疫诊断方法，同时表明了密码子偏好性的优化可显著提高蛋白表达量。

分类号：

  • 相关文献

[1]Bt抗、感种群亚洲玉米螟幼虫取食Bt玉米后Cry1Ab杀虫蛋白在其体内的组织分布与含量. 王振营,何康来,白树雄. 2007

[2]莱姆病螺旋体鞭毛平截性蛋白的表达及其诊断潜力研究. 仝彩玲,吴银娟,周勇志,曹杰,李培英,周金林. 2011

[3]阿司匹林丁香酚酯对肝脏主要药物代谢酶活性的影响. 陶琦,郝若晨,刘希望,秦哲,李世宏,白莉霞,李剑勇,杨亚军. 2023

[4]环形泰勒虫重组TA04380蛋白的原核表达及ELISA的建立. 曹天行,刘军龙,张志刚,史康妍,石苗,关贵全,李有全,殷宏,罗建勋. 2022

[5]绵羊痘病毒E3L基因在Vero细胞中的表达. 于少雄,颜新敏,赵志荀,吴国华,叶奕优. 2014

[6]绵羊痘病毒甘肃流行株膜蛋白ORF23基因的克隆及序列分析. 张冬峰,郑亚东,骆学农,王晓霞,陈轶霞,李辉,侯俊玲,景志忠,才学鹏. 2009

[7]绵羊痘病毒研究综述. 颜新敏,张强. 2010

[8]羊痘野毒感染与弱毒免疫iELISA鉴别诊断方法的建立. 李慧霞,朱学亮,刘振勇,窦永喜,李辉,骆学农,才学鹏. 2013

[9]绵羊痘病毒ORFL21基因的序列分析及其B细胞表位预测. 陈轶霞,乔自林,刘俊林,王明明,陆会宁,郑亚东,陈智华. 2009

[10]绵羊痘病毒ORF121基因的序列分析及其B细胞表位预测. 陈轶霞,乔自林,刘俊林,王明明,陆会宁,郑亚东,陈智华. 2009

[11]两种用于鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒方法的应用与比较研究. 颜新敏,张强,吴国华,李健,朱海霞. 2009

[12]绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因orf118的克隆及序列分析. 张冬峰,郑亚东,骆学农,王晓霞,陈轶霞,李辉,侯俊玲,潘晓梅,刘琼,景志忠,岳城,才学鹏. 2008

[13]绵羊痘病毒E3L蛋白N端结构和功能预测. 卢昌,吴国华,颜新敏,赵志荀,于少雄,叶奕优,朱海霞,李健,张强. 2013

[14]绵羊痘病毒甘肃流行株ORF121基因的克隆及序列分析. 陈轶霞,才学鹏,郑亚东,张冬峰,骆学农,乔自林. 2009

[15]绵羊痘病毒TaqMan-MGB荧光定量PCR快速检测方法的建立. 李杨,于少雄,颜新敏,吴国华,李健,叶奕优,赵志荀,朱海霞,张志东. 2016

[16]绵羊痘病毒RPO30基因的克隆及序列分析(英文). 赵志荀,吴国华,颜新敏,李健,朱海霞,张强. 2011

[17]绵羊痘病毒甘肃流行株膜蛋白ORF23基因的克隆及序列分析. 张冬峰,郑亚东,骆学农,王晓霞,陈轶霞,李辉,侯俊玲,景志忠,才学鹏. 2009

[18]绵羊痘病毒甘肃流行株糖蛋白基因ORF117的克隆及其原核表达. 王晓霞,郑亚东,骆学农,陈轶霞,李辉,侯俊玲,于三科,才学鹏. 2009

[19]绵羊痘病毒RPO30基因的克隆及序列分析. 赵志荀,吴国华,颜新敏,李健,朱海霞,张强. 2011

[20]绵羊痘病毒RP030基因的克隆及序列分析. 赵志荀,吴国华,颜新敏,李健,朱海霞,孙晓林,张强. 2011

作者其他论文 更多>>