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猪流行性腹泻病毒N蛋白阻断ELISA抗体检测方法的建立及初步应用

文献类型： 中文期刊

作者： 万颖;周改静;麻园;石正旺;肖书奇;罗俊聪;宋锐;曹丽艳;杨波;王丽娟;田宏;郑海学

作者机构：

关键词： 猪流行性腹泻病毒;N蛋白;抗体检测;阻断ELISA

期刊名称：畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2022 年 53 卷 04 期

页码：

收录情况： 北大核心（2020版） ; CSCD（2021-2022年度） ; 科技核心（2021版） ; 农林核心（2020版）

摘要： 旨在建立一种猪流行性腹泻病毒（PEDV）N蛋白阻断ELISA抗体检测方法。本研究将纯化的N蛋白作为包被抗原，通过棋盘滴定法优化ELISA反应条件，建立了检测PEDV抗体的阻断ELISA方法，并对其进行特异性、敏感性和重复性试验。对140份临床血清样品进行检测，并将检测结果与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒试剂盒进行比较。结果显示，建立的阻断ELISA方法的抗原最佳包被浓度为625 ng·mL-1,血清最佳稀释比例为1∶1;酶标抗体的最佳工作浓度为1∶5 000;检测健康猪血清以及猪瘟病毒（CSFV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和传染性胃肠炎病毒（TGEV）等常见猪病病原的阳性血清，均无交叉反应；PEDV阳性血清的灵敏度为1∶16,与市售IDvet PEDV间接ELISA抗体检测试剂盒（效价1∶32）的敏感性相当；批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%,说明具有良好的重复性和稳定性；对140份临床血清样品的检测并与商品化试剂盒检测结果进行比较，两者的kappa值为0.87,为高度一致。综上表明，本研究建立的阻断ELISA抗体检测方法可以应用于PEDV的防控、流行病学调查以及疫苗免疫后抗体水平的监测。

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