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赤羽病病毒N蛋白原核表达及单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 林永玉;石正旺;罗俊聪;朱昱茜;席韬;周静;张帆;石鑫泰;王川;田宏;郑海学

作者机构：

关键词： 赤羽病病毒;N蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2024 年

页码：

收录情况： 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2023-2024年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 为制备赤羽病病毒(akabane virus， AKAV) N蛋白的单克隆抗体(monoclonal antibody， mAb)，本研究利用原核表达系统表达了AKAV N蛋白，纯化后免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行融合获得杂交瘤细胞，采用间接酶联免疫吸附方法(enzyme linked immunosorbent assay， ELISA)筛选获得阳性杂交瘤细胞。经3次亚克隆筛选得到两株特异性针对AKAV N蛋白的杂交瘤细胞株，分别命名为2C9与5E9。通过ELISA、免疫印迹(Western-blotting)、间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay， IFA)对其进行鉴定。结果显示，成功筛选到特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体。IFA发现其与AKAV N蛋白具有良好的反应性，亚型鉴定试剂盒鉴定2C9 mAb重链为IgG2b型，轻链为κ链；5E9 mAb重链为IgG1型，轻链为κ链；ELISA检测效价均为1:4 096 000。本研究成功制备了两株特异性针对AKAV N蛋白的单克隆抗体，为赤羽病诊断方法的开发、疾病的防控以及AKAV N蛋白功能的研究奠定了基础。

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