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羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及双抗原夹心ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 杨倩倩;廖焕程;石正旺;罗俊聪;陈婕;张帆;王琳;谢亚格;周正;武嘉惠;田宏;郑海学

作者机构：

关键词： 羊副流感病毒3型;N基因;双抗原夹心ELISA;原核表达

期刊名称：生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2025 年

页码：

收录情况： EI（2025版） ; ; 北大核心（2023版） ; ; CSCD（2025-2026年度） ; ; 科技核心（2024版）

摘要： 本研究旨在建立一种检测羊副流感病毒3型血清抗体的双抗原夹心ELISA方法，用于羊副流感病毒3型血清抗体感染临床诊断。合成N基因(NCBI数据库登录号：MT756864.1)并构建至pET-30a中，命名为pET-30a-N，利用大肠杆菌原核表达、亲和层析纯化N蛋白。用间接ELISA方法和Western blotting方法验证N蛋白反应性。用凝血酶(1:10 000)酶切N蛋白His标签。通过优化抗原包被浓度、酶标抗原稀释比例、血清稀释比例等条件，最终建立用于检测临床样本羊副流感病毒3型血清抗体的双抗原夹心ELISA方法。结果发现，间接ELISA方法和Western blotting方法鉴定N蛋白具有良好的反应性。N蛋白His标签成功切除，且酶切后的N蛋白反应性未改变。通过棋盘法得到最佳抗原包被浓度为0.5 μg/mL；HRP酶标抗原稀释度为1:10 000；血清最佳稀释比例1:20；双抗原夹心ELISA临界值为0.237；与口蹄疫病毒O型(foot-and-mouth disease virus， FMDV-O)、羊痘病毒(sheep/goat pox virus， GTPV)、羊口疮病毒(orf virus， ORFV)、布鲁氏菌(Brucella)的抗体阳性血清均无交叉反应，与商品化试剂盒相比较敏感性高达1:512；批间和批内的变异系数均小于10%。用本研究建立的方法与圣博羊间接ELISA试剂盒同时对150份田间羊临床血清进行检测，两者的符合率为87%。本研究所建立的双抗原夹心ELISA方法具备特异性强、敏感性高、重复性好等特点，为羊副流感病毒3型血清抗体大规模样品监测、血清学调查、疫病防控提供了有效的技术手段。

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